AAARGGGHHH ich dreh ab… nach langer Etablierung hat meine PCR jetzt endlich geklappt… und auf einmal geht gar nichts mehr! Woran kann das liegen?? Die Polymerase funktioniert, der cycler auch… die dNTPs werden auch von anderen benutzt und machen keine probleme… genauso die Puffer… es kann logischerweise nur an den primern liegen wenn ich das richtig sehe… die habe ich aber gerade erst seit etwas über einem monat… da können die doch nicht schon kaputt sein?? Ich tau den stock immer nur auf, wenn ich neue verdünnungen machen muss… das dürfte dem doch eigentlich nichts ausmachen?? ich bin am ende… es hat so toll funktioniert und von einem tag auf den anderen kriege ich kein produkt mehr…
((
AAARGGGHHH ich dreh ab…
Ruhig, Brauner!
Sowas passiert.
Temperatur-Profil am Cycler nochmal kontrollieren.
Auch mal andere Cycler benutzen. Cycler können Probleme mit der Temperatursteuerung haben, die man nicht bemerkt, solange die PCR robust ist. Wenn du eine sensible PCR hast, kann es sein, dass sie bei dir nicht klappt, bei allen anderen aber schon.
Ist das Template ok? Funktioniert das mit anderen Primern?
Es hilft manchmal, selbst in ein anderes Lab zu gehen und es dort nochmal zu versuchen. Außer den Primern nichts mitnehmen! Wenn es dort klappt, waren es eins der Reagenzien oder der Cycler.
Auch: Jemand anderen bitten, die Reaktionen für Dich mal zu machen (in deinem Lab). Wenn es dann klappt, lag der Fehler bei Dir.
Wenn du glaubst, die Primer sind schuld (was ich nicht glaube, denn Primer sind stabil), nicht lange zögern sondern neue Primer bestellen! Die kosten nicht die Welt, wochenlange Fehlersuche ist deutlich teurer!
LG
Jochen
Hallo Anika,
hast du vielleicht zu viel DNA eingesetzt???
Dies ist mir mal passiert!! Versuche mal deine Probe zu verdünnen.
Grüße
BadReality