Hallo,
ich will DNA aus dampfsterilisierten Bodenproben extrahieren und bin bis jetzt recht erfolglos geblieben.
Könnte sie durch die Sterilisierung (6h) zerstört worden sein?
Mir wurde gesagt DNA hält autoklavieren aus!?
Dank im vorraus!
Philipp
Mir wurde gesagt DNA hält autoklavieren aus!?
Das ist zwar nicht ganz falsch, aber richtig ist es auch nicht. Zwar hält DNS kurzes Autoklavieren aus, aber bei längerem Erhitzen ist das eine bewährte Methode zur Zerstörung vcon DNS-Rückständen.
Hallo Philipp,
auch wenn es die DNA „aushält“: Du willst ja nicht nur extrahieren, sondern nach der Extraktion etwas mit der DNA anstellen. In jedem Fall wäre es dann für Dich wichtig, dass die Struktur der DNA nicht angegriffen worden ist. Genau das tust Du aber beim Autoklavieren. Warum übrigens autoklavieren? Was wolltest Du mit der Sterilisation bewirken?
Beste Grüsse
Anna
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Hi Phillip,
Generell ist DNA ist sonderlich labil. Hyperthermophile Archaea leben ja auch bei 110°C, allerdings haben die Reparatursysteme…
Warum sterilisierst du VOR der DNA-Extraktion ? Im Extrakt hast du sicher keine Viren/Bakterien mehr, und den Rest kannst du ja immer noch sterilisieren.
Jochen
Hi Philipp!!
Auch ich frage mich, wieso Du vor der Extraktion die Bodenproben sterilisieren willst. Die DNA bleibt mit Sicherheit nicht unbeschädigt.
Falls dies irgendwelche Gründe hat, liegt der Fehler sicherlich in der Zeitdauer des autoklavierens.
Um 9 Liter Nährmedium zu sterilisieren reicht ca. 1h im Autoklaven aus. (20ml ca. 15 min.)
Bei einer Bodenprobe von vielleicht 50 bis 100g sind 6h viel zu viel!
Gruss
Thomas