Irgendwann habe ich mal gelernt, das man beim Ansetzen von SDS-PAGE-Gelen die Ausgangslösung vor dem Polymerisieren gut entlüften soll. Jetzt habe ich von anderer Stelle gehört, dass das gar nicht nötig sei.
Kann mir jemand sagen, wozu das Entlüften überhaupt gut sein soll?
Feine Glasbläschen könne die Leitfähigkeit beeinflussen, daher das Entlüften. Das Ergebnis ist dann besser, aber dramatisch ist der Effekt nicht.
Michael
Hi Jun Lee,
wenn SDS-PAGE-Gele Polyacrylamidgele sind (die kenn ich unter einer anderen Abk.) muß entlüftet werden, weil die Polymerisation unter Anwesenheit von Sauerstoff schlechter und unter Umständen gar nicht abläuft.
Dazu kommt, daß Du sicher einigermaßen reproduzierbar arbeiten möchtest und durch das inertisieren ein einigermaßen definierter Ausgangszustand geschaffen wird. Die Trennwirkung wird zum einen durch die Menge an Vernetzer gesteuert, aber auch durch die Molmasse. wenn die nun ‚eiert‘, ist jede Trennung wieder was neues.
Gandalf
Jepp,
bei Anwesenheit von Sauerstoff kommts zum Kettenabbruch bei der Polymerisierung. Das ist bei kleinen 5% Gelen mit 0,75 Dicke nicht soo dramatisch aber wer mal versucht hat eine IEF mit einem Urea-SlabGel zu machen wird das Entlüften lieben lernen
)
Es kommt auf den Anspruch an die eigene Arbeit an. Wie Gandalf schon sagt ists auf jedem Fall im Sinne der Reproduzierbarkeit. Unterschiedlich gut durch Polymerisierte Gele haben unterschiedliche Eigenschaften.
JD
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