Hallo Ihr kleinen Biologen da draussen!
Ich habe folgendes Problem: Ich muss RT-PCR machen und habe dauernd DNA-Kontaminationen drin. Jetzt will ich nach der RNA-Isolierung einen DNase-Verdau machen. Aber nun stellt sich das Problem, wie ich die DNase wieder inaktivieren kann. Gibt es DNase-Inhibitoren oder muss man sie hitzeinaktivieren (15 min, 70°C).
Ich würde mich freuen, wenn mir jemand helfen kann.
Danke schon mal
Eure Dagi
Drauf rumkochen (65-95°C) reicht völlig aus. Das heißt: Wenn du die RNA in eine RT-PCR einsetzen willst, brauchst du dir über die DNAse keine gedanken zu machen. 1. Denaturiert diese in der initialen Danaturierungsphase und 2. stört Protein die PCR nicht (manchmal hilft’s sogar ein besserl).
Kann sein, daß du auch nach einem DNAse-Verdau noch DNA drin hast (startest du von einem Plasmid?), dann mach einen weiteren Verdau, meistens hilft’s.
Jochen