Genaue OD - Messung

Hallo !

Ich stecke mal wieder in einem Erklärungsnotstand:

Für Konzentrationsbestimmungen von Proteinen bei OD-Messungen, heißt es, erziehlt man die GENAUESTEN Ergebnisse, wenn der gemessene OD280 nahe bei 0.87 liegt. Warum ?? Wie kommt man darauf ? Es gibt dafür eine mathematische Herleitung, die ich leider nicht kenne. Es muß was damit zu tun haben, daß OD-Messungen relative Messungen sind, der Extinktionskoeffizient spielt wohl eine Rolle und die 0.87 folgt wohl aus der Bedingung, daß das Signal/Rausch-Verältnis maximal sein muß.

Kann mir jemand helfen ??

Danke,
Jo

Bei der OD-Messung ist es so, dass die Korrelation zwischen Absorption (Extinktion) nicht linear verlaeuft. Zweitens unterscheiden Biologen/Biochemiker oft nicht so streng zwischen Extinktion und Absorption, was daran liegt, dass das englische Wort „absorption“ im deutschen eher der Extinktion entspricht als der Absorption. Fuer Werte deutlich unterhalb von 1.0 sind beide Effekte jedoch vernachlaessigbar. Andererseits ist es natuerlich auch so, dass der relative Messfehler umso groesser wird, je kleiner die Konzentration in der Probe ist.

Drittens kann es bei zu hoher Proteinkonzentration zu Fehlbestimmungen durch Aggregation kommen, ab welcher Konzentration dies auftritt ist aber substanzabhaengig.

Ein Wert von 0.87 als Optimum erscheint mir schon etwas hoch, aber das haengt wirklich von dem zu messenden Protein und der Linearitaet des Photometers ab.

Joern