Hi,
ich bin auf der Suche nach einer guten Vorschrift zum Nachweis von Glykoproteinen auf einem Blot. Und zwar habe ich hier nur allgemeine Hinweise, dass nach dem Blotten eine Behandlung mit Periodat erfolgt und dann laesst sich wohl ein Biotin-derivat koppeln.
Kann jemand weiterhelfen?
Gruss derweil und Danke
Marco
Hallo Marco,
wie man Glykoproteine nach dem Blotten anfärbt, weiß ich zwar nicht, aber man kann vor dem SDS-PAGE und Blotten durch „Verdau“ eines Glykoproteins mit z. B. Glycopeptidase F dessen Zuckerketten abspalten (mit anderen Enzymen kann man sogar spezififische Oligosaccharide abspalten), so daß man bei Auftragung von verdautem und zum Vergleich unverdautem Protein einen Molekulargewichtsunterschied auf dem Blot sehen kann, wenn es sich bei dem untersuchten Protein um ein Glykoprotein handelt. Das ganze setzt aber voraus, daß Du dein Protein auf dem Blot detektieren kannst, z. B. mit einem spezifischen Antikörper. Wenn Dir das was hilft und Du noch weitere Info brauchst, melde Dich.
Viele Grüße!
Melissa