ich hatte gestern schon mal eine Anfrage losgelassen und - besten Dank - auch gleich eine gute Antwort bekommen. Aber jetzt stehe ich vor dem nächsten Problem bei meinem Studienprojekt:
„Der mittlere Abstand zwischen dem intrinsichen Fluorophor und der Solvathülle Ihres Makromoleküls soll durch flourimetrische Methoden ermittelt werden.“
Den Inhalt des Satzes habe ich inzwischen verstanden (ich stamme nicht ursprünglich aus dem Bereich Chemie), aber wo finde ich eine Beschreibung des oben erwähnten Verfahrens zur Abstandsmessung? Bis jetzt habe ich nur Dissertationen von mehreren hundert Seiten Umfang gefunden, die ich meißt garnicht verstehe. Ich wäre für einen guten Link oder eine kurze Beschreibung sehr dankbar.
ganz ohne Anspruch auf Vollständigkeit kann ich dir nur das Prinzip eines Verfahrens nennen, das ich kenne.
Wenn ein Fluorophor angeregt wird, dann fluoresziert er. Wenn dann aber gerade eine andere Substanz in der Nähe ist, die ein dem Fluoreszenzspektrum überlabbendes Absorptionsspektrum hat, dann kann das Fluorophor die Anregungsenergie auch auf das andere Molekül (den „Akzeptor“) übertragen, wobei natürlich keine Fluoreszenz abgestrahlt wird. Der Mechanismus der Energieübertragung basiert auf einer Wechselwirkung (Resonanz) der Pi-Elektronensysteme der beiden beteiligten Moleküle. Er wurde in den 50ern von einem Herrn Förster beschrieben und seither als „Förster-Transfer“ oder auch als Fluoreszenz-Resonenz-Energie-Transfer (FRET) bezeichnet. Die Effizienz, mit welcher die Energie übertragen wird, ist Abhängig von der Lage der Moleküle zueinander und auch von deren ABSTAND. Bei der sog. „Förster-Distanz“ beträgt die Effizienz 50% (sie beträgt meist so um die 30-100nm). Je effizienter die Übertragung, desto weniger Fluoresziert das Fluorophor nach Anregung. Wenn man die „Förster-Distanz“ für ein Donor-Akzeptor-Paar kennt, kann man aus der relativen Fluoreszenzintensität eben den Abstand berechnen.
WENN - wenn! - in deinem Fall das Solvens als Akzeptor dient, dann könnte man das genau so machen. OB das aber der Fall ist, kann ich nicht beurteilen.
Sicher gibt es nich viele andere Möglichkeiten, solche Abstände zu messen, aber ich kenne jetzt nur diese eine.
Wenn man die „Förster-Distanz“ für ein Donor-Akzeptor-Paar
kennt, kann man aus der relativen Fluoreszenzintensität eben
den Abstand berechnen.
Soweit ich die Aufgabe verstanden habe, sollen wir ein frei verfügbares Makromolekül (wir haben uns bis jetzt für Tryptophan entschieden) in Wasser als Solvathülle untersuchen. Der Abschnitt der Aufgabenstellung lautet: „Vergleichen Sie das Emissionsmaximum (des Makromolüls) mit dem Emissionsspektrum von Wasser. Berechnen Sie die Energie, die beim inelastischen Streuprozeß auf die Wassermoleküle übertragen wird in drei unterschiedlichen Energieeinheiten. Vergleichen Sie die Ergebnisse mit dem RAMAN-Spektrum von Wasser.“
Kennst Du eine Tabelle, in der wir entsprechende Werte nachsehen könnten? Oder habe ich hier was mißverstanden?
Soweit ich die Aufgabe verstanden habe, sollen wir ein frei
verfügbares Makromolekül (wir haben uns bis jetzt für
Tryptophan entschieden) in Wasser als Solvathülle untersuchen.
Tryptophan ist kein Makromolekül, sondern eine Aminosäure. Es ist allerdings ein Baustein verschiedener Proteine (die bestehen ja aus Aminosäuren). Wegen seines aromatischen Charakters hat es auch Eigenschaften eines Fluorophors. Das Absorptionsmaximum liegt im UV-Bereich bei ca. 280nm. Man macht sich die Absorption von Tryptophan zu nutze, um mit spektrophotometrischen Messungen ganz allgemein die Proteinkonzentrationen von Lösungen zu bestimmen.
Hierin weitere Verweise, insbesondere gleich in der Einleitung:
Fluorescence from the amino acid tryptophan has long been known to be sensitive to the polarity of its local environment (Beechem and Brand, 1985; Demchenko, 1986; Eftink, 1991; Konev, 1967; Lakowicz, 1999; Longworth, 1971; Weber, 1960), and is an inviting candidate for such a probe, except that the required microscopic information has not been conveniently accessible.
Und zu guterletzt noch eine ganze Dissertation zum Thema, da solltest du alles finden, und zwar nicht nur Tabellen, sondern auch Erklärungem Hintergründe, Beispiele: