Hallo !
Mancher misst Signale mehrerer Fluoreszenz-Farbstoffe in mehreren „Kanälen“ (decken das Emissionsmaximum je eines Fluorophors ab) gleichzeitig und möchte wissen, wie stark nun die Signale der einzelnen Fluorophore waren.
Problem: Die Spektren sind ja breiter als die Kanäle, also messe ich in den benachbarten Kanälen auch noch Anteile der Signale von den Fluorophoren, die dort nicht ihr Emissionsmaximum haben.
Nehmen wir mal an, ich messe in n Kanälen n Signale von n verschiedenen Fluorophoren (einzeln, NICHT gemischt), kann ich dann sagen:
der Signal-Anteil des Fluorophors x, den ich in Kanal y messe, ist unabhängig von der Konzentration des Fluorophors ?
Wenn das so ist, kann ich eine n x n - Matrix mit den Signal-Anteilen erstellen (z.B. a2,3 = Anteil des Fluoreszenzsignals des Fluorophors Nr. 2, den ich in Kanal 3 messe; Emissionsmax. von Fluorophor i wird in Kanal i gemessen -> ai,i = 1).
Messe ich nun ein GEMISCH von Fluorophoren, gilt dann folgendes:
Das gemessene Signal in einem Kanal ist gleich der Summe der Produkte Anteil*Einzelfluoreszenz ? Das kann man dann nach den unbekannten Einzelfluoreszenzen der Fluorophore auflösen.
Kann man das alles so machen oder gibt es andere Verfahren zur Elimination des Crosstalks ?
(
Bsp: 2 Fluorophore:
F1m = a1,1*F1r + a2,1*F2r
F2m = a1,2*F1r + a2,2*F2r
wobei
F1m = gemessenes Signal in Kanal 1,
F2m = gemessenes Signal in Kanal 2,
F1r = reales, aber unbekanntes Signal von Fluorophor 1
F2r = reales, aber unbekanntes Signal von Fluorophor 2
a1,1 = Anteil F1r in Kanal 1 (=1, per Definition)
a1,2 = Anteil F2r in Kanal 2
a2,1 = Anteil F2r in Kanal 1
a2,2 = Anteil F2r in Kanal 2 (=1, per Definition)
)
Liebe Grüße und Danke für Tipps !
Jochen