Hallo,
hat jemand vielleicht eine einfach Methode um aus Hämoglobin das Eisen rauszubekommen?
Danke und viele Grüße,
Steffen
Hallo,
hat jemand vielleicht eine einfach Methode um aus Hämoglobin
das Eisen rauszubekommen?
ganz simpel: Trocknen und veraschen. Für Analyse
a) quantitativ durchoxidieren, indem bei Luftzutrit ausgeglüht und als Fe2O3 zurückgewogen
b) veraschen, aufnehmen mit halbkonz. HCl, komplett in Lösung bringen, mit NH3 ausfällen (entfernt Ca und Mg), Niederschlag quanmtitativ filtrieren, waschen und wieder mit HCl in Lösung bringen.
Auffüllen und alioquoten Teil nach Reinhardt-Zimmermann titrieren
(http://www.tu-braunschweig.de/Medien-DB/iaac/redoxti…
oder Jander Blasius konsultieren)
c) Auffüllung aus b) zur AAS bringen
Gruß
BeLa
wird
Hallo Bela,
sorry, habe mich etwas mißverständlich ausgedrückt:
ich möchte das Eisen vom Protein trennen - um das Protein danach weiterzuverwenden.
Gruß, Steffen
Hallo,
sorry, habe mich etwas mißverständlich ausgedrückt:
ich möchte das Eisen vom Protein trennen - um das Protein
danach weiterzuverwenden.
ich binn raus, das ist eher was für die Fitzelchenfummler aus der Biochemie.
Wir Anorganiker sind da eher grobmotorisch… 
)
Gru
BeLa
Hallo Steffen,
vielleicht mit EDTA oder einem anderen Komplexbildner?
Ach, nee, ich glaub doch nicht - wenn ich mir das Häm so anschaue, ist das Eisen ja kovalent gebunden.
Wenn ich jetzt wüßte, ob das Häm nun auch kovalent an das Protein gebunden ist…
Aber wenn ich das zu dieser morgendlichen Stunde richtig erkenne, wird es nur von zwei Histidinen am Ort gehalten. Dann könnte man evtl. etwas über Konformitäts- oder Ladungsänderungen durch andere pH-Werte o.ä. probieren?! Und einen Reinigungsschritt anschließen lassen?
Bei Wikipedia (unter „Häme“) stolpere ich noch über eine Hämoxygenase, die den Ring kaputt macht und das Eisen abspaltet. Vielleicht ist das auch noch ein Ansatz.
So, das war jetzt erstmal mein Brainstorming.
Und falls es jemand noch nicht gemerkt hat: ich arbeite nicht mit Hämoglobin, und habe es auch noch nie getan. Vielleicht gibt es ja auch ganz einfache Standardmethoden, die ich schlicht nicht kenne… *g*
Gruß
Arha
Hallo
sorry, habe mich etwas mißverständlich ausgedrückt:
ich möchte das Eisen vom Protein trennen - um das Protein
danach weiterzuverwenden.
Das schaffst Du nicht, sogar der Stoffwechsel hatte
eine Milliarde Jahre zeit und schafft es nur, das
Zeugs durch Proteinzerstörung (Bilirubin) wieder
herauszubekommen.
http://hyper.ahajournals.org/cgi/content/abstract/25…
(Das würde imho auch rein sterisch schon nicht gehen.)
Grüße
CMБ
Addendum:
besorg Dir mal diesen
http://www.springerlink.com/content/y6v8g271n1835811/
Artikel.
...
Die blauviolett schillernden Kristalle des leicht zu-
gänglichen Hämins haben als Ausgangsmaterial für
zahlreiche chemische Umsetzungen gedient. M. NENCKI
und N. SIEBER beschrieben die Bildung von Hämatin
aus Hämin, wobei das am Eisenatom stehende Chloratom
durch Hydroxyl ersetzt wird und bestätigten die
von F. HOPPE-SEYLER aufgefundene Darstellung von
Hämatoporphyrin (Fig. 2) aus Hämin durch die Behandlung
mit konzentrierter Salzsäure, wobei das
komplex gebundene Eisenatom entfernt und an den
beiden Stickstoffatomen durch Wasserstoff ersetzt
wird. Gleichzeitig treten an den beiden ungesättigten
Seitenketten 2 Moleküle Wasser ein. Etwas später gelang
M. NENCKI und J. ZALESKI 1 die Reduktion des
Hämins zum Mesoporphyrin (Fig. 2). Der für die Reduktion
verwendete Bromwasserstoff entfernt nicht
nur das komplex gebundene Eisenatom, er sättigt auch
die beiden Doppelbindungen der Seitenketten ab.
...
Grüße
CMБ
hat jemand vielleicht eine einfach Methode um aus Hämoglobin
das Eisen rauszubekommen?
Man kann das Hämin von dem Proteinanteil trennen: Man lässt Blut in heißen NaCl haltigen Eisessig einfließen. Es fällt ein braunes kristallisiertes Salz (Teichmannsche Kristalle) aus, das Hämin.
Aus Hämoglobinlösungen kann man durch HCl/Aceton ebenfalls das Häm abtrennen. Bei Neutralisation nimmt das Globin dann das Häm wieder auf. Wenn alles in reduzierender Lösung vor sich geht, oxidiert auch das Eisenatom nicht.
Zur Trennung unter physiologischen Bedingungen muss der pH unter 6 gestellt werden, dann trennen sich die 4 Proteinketten voneinander und können mit Ionenaustauscher- Chromatographie gereinigt werden.
Um eine exakte Vorschrift zu erhalten musst Du also mit Stichworten Hemoglobin + chromatography, ion- exchange chromatography oder molecular sieve chromatography suchen.
Udo Becker