Hallo,
Ich arbeite gerade an einem Promoter-Assay (Dual Luciferase Reporter Assay System). Nach der ersten Messung fällt auf, dass unterschiedliche preps der gleichen Promotoren-Klone unterschiedlich hohe Werte ergeben.
Ein Gelbild der unverdauten Plasmide zeigt: Hohe Werte entstammen supercoiled DNA, niedrige Werte stammen von Plasmiden die offensichtlich größer formiert sind (Katenane?).
Prozedere der Gewinnung und Aufreinigung sowie Konzentrationen sind identisch.
Kann man die Plasmide nun vielleicht linearisiert einsetzen?
Oder wie vermeidet man diese unterschiedlichen Formierungen?
Bakterien: Xl1bue
Vektor: pGl3
Zellen: K 562
Transfektion: TransFast (Promega)
Aufreinigung: Qiagen Endo-free Plasmid Maxi Kit
Entschuldigt meine etwas unwissenschaftliche Art der Formulierung - bin keine Biologin. ;o)
Sollte jemand Erfahrung mit dem Dual-Luciferase Reporter Assay Kit haben so würde ich mich über eine Rückmeldung freuen, denn es gibt da noch andere seltsame „Erscheinungen“ bzgl Renilla und Quotient.
Grüße
M.