RNA-PolymeraseII Promoter TATA-Box

Hallo nochmal!

Ich versuche gerade, die Expression des Drosophilagens wurst nachzuvollziehen. Ich wollte mit Tools im Internet nach Promotersequenzen suchen, aber das hat irgendwie garnicht funktioniert :frowning:
Dann wollte ich wenigstens die TATA-Box finden und hab mit meinem eigenen Gehirn hingeschaut. Das einzige, was ich bei -94bp gefunden habe ist „TATACAA“. Könnte das meine TATA-Box sein?

Wen einer ne tolle Suchmöglichkeit für sowas kennt, wäre es nett, sie mir zu nennen.

Vielen Dank, Stefan

Ich habe mal angegeben im FASTA-Format 10kb upstreamsequenz und die Sequenz des Primärtranskrips:

>wurst 10kb up von +1 (sense und in 5’3’)X:16844859,16834860
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>Gentranskript Wurst loc=X:complement(16832530…16834859)
ATTCAATTTTTTAATCCAGCCCGCAAAACAACAAATTCGTATTGTTTCAA
ATTGTTTCAATTGCAATTTTAGTGAAACATAGCAACAACCAGTTCAAATT
GAACGCATCAGTGCACTTGGTTTTCTTTTTTTTTTTTGTTTTTGTGGATC
AGTTTGTCGTTTTTGTTCTTGTTGTCGCTGCGTGCGTAGAATTTGTGAAA
AGAGAAAGTTCTGCGCCGCGTCTTTCTCCGCCTCTCTTTCTCCAATTCTT
CGCACAGTCGTGGCCAAGAAGTTGCGCCTGCGCAGCGACAATTTCACAAG
AAATCGAGGTCGATCGCAAGTGGGTAAGTATCTTTCACGGAAAGTGGCCC
AAAAAGTGATGTTTAAAGACTGGAACTAAAATAATAACAATAAATTAATT
ATATATCCTCGAAACTCTTTGCTGTATGTAGTCTTCATAAGAGTTTTCTT
TATAGGCCACCGTTCTTTATTCGTTGATTTAAAATACGTAAAGCTTATCT
TCAATCAGTTAAATGTGCTACATCAAATCGTGTTACTTTACTTAAAATAT
TCATATATATTTTAATATATTGTTATGTGTTGTATATTAGATATGCTTGT
TATGTTATTGCTCAGCGTGCCACTATTTCAACATATATTACGCTAATATA
TTAAGCTAATTAATTATTTCATAATTGCAATTTTTTGAATAATCGTTAAT
GTTGTACTACCAATATACATATGTTTATTATGTTATGTTGTTTTTTAAAA
GTTGTCCTCTTTCCATAATATTGTTAGTAAAACTACTTCCGAATTATTCC
GTTTATCATAACAATTTTGCCCCCTTCCCTTGCAGTAATCCGATTGGAAC
ACCATGGGCACCACGCAGACAGTATCTCCAGTGGCTGGAAAGGATAAGAC
CAACGATACCTCCAAAGGATCTCCCTCGAAGGCTAAGTCCAATGGCCACG
CGCAAGGCAAGACCAAAAGCAAGGAGATGAACGCTCTGCCGCCCCAGAAA
TCGGTGGTCATTGCCTATCTATGCTGGCTTTTCGGCGGAATCTTCGGCCT
GCATCATCTGTACTTGCACCGTGACCGCCACGCCTTCATTTGGTGGTGCA
CCCTGGGTGGCTACATGGGCATTGGCTGGATGGGCGAGCTCTTCCTGATA
CCCGAATATGTACGGGATGCCAACGAGGATCCCAAGTTCGTCAAGATGTT
CGTGGCCAAGCTGCAGGCGTATCCGAAACCGCCGTACTCCTCGAAGAGAT
TCGTGGGCCAGGTGATGATCGGCCATCTGTTCGGCCAGGTGTGCTCCATG
GCCATTCCGGAGACCCTGGTCGGTGGCTGGGATCTGAGCTTCCTACACTG
GACGATTCCGCTGTTTGTTTCGCTGGGCGTTTGGCTGGTGGGCAACATTG
GCCGGGAGCAGGGTGTATGGTGGCACTGCCTGGTGGCCGCCTATCTGGCG
TATCCGGCCAGGTATTTGATATATGACGAGACCTACTCCCTGCTGCTCAC
TGGTCTCGTGGCGGCACTGACCTTCGACGGCTTGTCCAAGCAGTGGCGCA
GGACTCCGCCGCGCAGGGGAAGCCCCGGTGAAAGGACCTTTAAGCTAACC
ACCGCCGTGATCATCTACTGCGCCTTCTGGGGCAGCTTCCTGTATTTCAA
CGGCACCATTTCGGACGAGGACGGCGGCGAGGTGCCCATTCACGAGGCCA
TCCATAACTTCTTGGCCTCCGCCTGGTGGACAGATCTGAAGCAAGCCCTG
CTGGACACCTATAACTATGCGCAGCATCACGGCTGGTACGAGACCTGGAA
GGAGGTGTTCGAAAGCATGGATGTGGATGGCGAACGAAATTCGTACAAGG
TCTTGGGCGTAAGTGCCACCGCTTCGCAGGCAGAGATCACCGCTGCGTAC
AGGAAGCTCTCCAAGGAGTACCATCCCGACAAGGTCAAGGACGAGGGCTT
GCGGGCCCAGGCCCACCAGCGCTTTATCGAAATCCAGCAGGCGTACAGTG
TGCTCAGCAAGATCAAGTCCAACCGGCGGCGCAAGAACAAACAGTACCAG
GAGGAGGAGGCCATCGTCCTTTGAGCGGCGCTTTCCTCCATCTAGTCTAA
GTATTTATAACGACTAGGAAGTAAGATTCTTTAAATGCGATTACTTACTT
AAAGCAATAGTACCTAAATGCTGCTATAGCACATATTGCGAATTCTCTAA
ATGTTATTCATATTAATTACCTAATGGTGTTTTTAGCTGTATCTGTTTCC
ACATGTATTTATTACCATAAATCTGCGTTGTTTATTGTCAAGACTGTGTT
TAAAAATATTAAAGCACCCCAAAATTCATT

Ich versuche gerade, die Expression des Drosophilagens wurst
nachzuvollziehen. Ich wollte mit Tools im Internet nach
Promotersequenzen suchen, aber das hat irgendwie garnicht
funktioniert :frowning:
Dann wollte ich wenigstens die TATA-Box finden und hab mit
meinem eigenen Gehirn hingeschaut. Das einzige, was ich bei
-94bp gefunden habe ist „TATACAA“. Könnte das meine TATA-Box
sein?

Also -94bp liegt m.E. zu weit von Start weg, für eine TATA-Box sollten es 25-30 bp sein.

Promotor-Sequenzen zu finden ist äußerst schwierig. Ich habe wenig Erfahrung mit der Vorhersage für Drosophila, aber beim Zebrafisch z.B. habe ich es schon ein paar Mal versucht und eigentlich nie mit dem Ergebnis zufrieden gewesen.

Allerdings ist wurst ein DnaJ-Homolog (oder hab ich das falsch verstanden?), und Heat Shock Proteine sind relativ konserviert. Vielleicht kannst Du homologe DnaJ-Sequenzen anderer Spezies heraussuchen und mit entsprechenden Vergleichsprogrammen Übereinstimmungen bzw. konservierte Muster suchen.
Es gab mal ein Vergleichsprogramm speziell für Promotor-Regionen von verwandten Genen, habe aber den Namen nicht mehr parat.

Letztlich helfen aber nur praktische Promotor-Studien im Labor, z.B. mit Hilfe von Konstrukten mit verschieden langen (oder teilweise deletierten) Promotor-Bereichen und angehängten Reportergenen, wie z.B. Luciferase.

Gruß