Western Blot - wet blot

Liebe Leute,

wir haben momentan in unserer Forschungsgruppe ein riesen großes Problem mit der Entwicklung unser Blots. Und wir wissen einfach nicht woran es liegen könnte. Es sind Proteine auf der Membran, die Milch ist neu angesetzt, sowie die Antikörper (primärer und sekundärer). Aber wenn wir entwickeln, ist einfach kein Siganal auf dem Film zu sehen. Wir nehmen zur Entwicklung den ECL-Kit. Kann mir irgendjemand helfen, der schon mit einem ähnlichen Problem konfrontiert wurde.

Vielen Dank.

Hi!

Ist nur das Protein nicht zu sehen, oder seht ihr auch keine Kontrollen?
(z.B. primärer und sekundärer AK direkt auf die Membran aufgetragen)

Liebe Grüße,
Manuela

Guten Tag,

ich kann zwar leider nicht direkt zur Problemlösung beitragen, aber stell deine Frage einfach mal in dieses Forum (englisch) im Bereich „Protein Methods“:

http://molecularbiology.forums.biotechniques.com/

Da tummeln sich Biochemie- und Molekularbio-Koniferen. Nur wollen die sicher noch einige zusätzliche Infos. Du lässt viele Fragen offen, ohne die dir auch dort niemand wirklich gezielt helfen kann.

LG
Huttatta